簡(jiǎn)要描述:四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過(guò)快速簡(jiǎn)便的顏色反應來(lái)檢測細胞存活數量。其原理是MTT可作為哺乳類(lèi)動(dòng)物細胞線(xiàn)粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時(shí),線(xiàn)粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替(Formazan)結晶并沉積在細胞中,結晶物能被二甲基亞砜 (DMSO)溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長(cháng)處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映活細胞的數量及其活性。
MTT細胞活性檢測服務(wù)
四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT方法),是通過(guò)快速簡(jiǎn)便的顏色反應來(lái)檢測細胞存活數量。其原理是MTT可作為哺乳類(lèi)動(dòng)物細胞線(xiàn)粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當有活細胞存在時(shí),線(xiàn)粒體內琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍紫色的針狀甲月替(Formazan)結晶并沉積在細胞中,結晶物能被二甲基亞砜 (DMSO)溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長(cháng)處測定其吸光度OD值,OD值的高低可間接反映活細胞的數量及其活性。
MTT法常用的研究:
1、檢測細胞活性:常作為細胞毒性試驗的一種方法。
2、體外藥物敏感實(shí)驗:該方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟、快速,重復性好,所需的細胞數較少,沒(méi)有放射性,目前廣泛的用于臨床前的抗癌藥物的篩選研究。
3、一些細胞因子活性的研究
實(shí)驗步驟:
1)將對數生長(cháng)期細胞用胰酶消化后配制成濃度為1-10×104個(gè)/ml的細胞懸液,按1000-10000個(gè)細胞/孔接種于96孔板,每孔加100μl。
2)將平板置37℃、 5%CO2濕度培養箱中24小時(shí)后,加入含有不同濃度受試樣本的培養液100μl,每個(gè)樣本不同濃度設平行的三個(gè)孔,對照組加不含樣本的培養液100μl,再放入培養箱中孵育24-72 小時(shí),
3)用快速翻板法倒掉培養液,每孔加入用無(wú)血清1640按5mg/ml新鮮配制的MTT溶液100μl,溫育4小時(shí),使MTT還原為甲 月替,再次倒掉上清液,每孔加DMSO(二甲基亞楓)200μl,用平板搖床搖勻后,使用酶標儀測定光密度值(OD)(參考波長(cháng)450nm,檢測波長(cháng)570nm),以溶劑對照處理細胞為對照組,按下述公式計算化合物對細胞的抑制率,并按中效方程計算半數抑制濃度IC50:
客戶(hù)方需提供:
樣本描述,相關(guān)的實(shí)驗設計內容如作用時(shí)間和樣本濃度等。
公司方提供:
實(shí)驗結果IC50值。
實(shí)驗周期與費用:
實(shí)驗費用以樣本數和細胞株的種類(lèi)數目為單位計算,實(shí)驗周期為18個(gè)工作日,公司將在材料和預付的實(shí)驗經(jīng)費全部到位后25個(gè)工作日之內提交實(shí)驗結果??蛻?hù)需在收到實(shí)驗結果后一周內付清所有剩余款項。