簡(jiǎn)要描述:慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性:整合入宿主細胞基因組,長(cháng)期表達,可用于轉基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性:比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細胞,更重要的,還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調控、過(guò)表達特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝服務(wù)
慢病毒簡(jiǎn)介
慢病毒是逆轉錄病毒的一種,具有逆轉錄病毒的基本結構和特性:整合入宿主細胞基因組,長(cháng)期表達,可用于轉基因動(dòng)物制備;但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性:比逆轉錄病毒具有更高的滴度,不僅可以感染分裂期細胞,更重要的,還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,可以研究啟動(dòng)子的調控、過(guò)表達特定基因或沉默特定基因。
慢病毒包裝技術(shù)特點(diǎn)
病毒表達系統 | 腺病毒表達系統 | 慢病毒表達系統 |
病毒基因組 | 雙鏈DNA病毒 | RNA逆轉錄病毒 |
自主復制 | 不能 | 不能 |
是否整合 | 病毒基因組游離于宿主基因組外,瞬時(shí)表達外源基因 | 病毒基因組整合于宿主基因組,長(cháng)時(shí)間、穩定表達外源基因 |
感染細胞類(lèi)型 | 感染絕大多數細胞,包括分裂期、非分裂期細胞。 | 感染絕大多數細胞,包括分裂期、非分裂期細胞。 |
表達豐度 | 高水平表達 | 中水平表達 |
表達時(shí)間 | 快(1-2 天) | 慢(2-4 天) |
滴度 | 滴度可達10E12pfu/mL | 滴度可達10E9-10E10TU/mL |
克隆容量 | 可插入高達8kb的外源片段,滴度隨插入片段長(cháng)度增加而降低 | 可插入不超過(guò)8kb的外源片段,滴度隨插入片段長(cháng)度增加而降低 |
免疫原性 | 高免疫原性 | 低免疫原性 |
RNAi | 病毒進(jìn)入細胞往往引起細胞內干擾素反應,一般情況下不適合做RNAi實(shí)驗 | 適合,是RNAi實(shí)驗的優(yōu)選工具 |
基因過(guò)表達 | 包裝容量較大,可以滿(mǎn)足較大基因的包裝,是過(guò)表達基因的優(yōu)選工具 | 包裝容量有限,過(guò)表達的基因過(guò)大時(shí),病毒滴度受到影響 |
過(guò)表達microRNA | 適合 | 適合,是過(guò)表達microRNA實(shí)驗的優(yōu)選工具 |
下調microRNA | 有報道但不成熟 | 有報道但不成熟 |
是否可以自行擴增 | 可以 | 需要特殊包裝系統和包裝環(huán)境 |
A. 慢病毒載體的構建:
根據不同的研究需求構建慢病毒載體,如用于RNAi的慢病毒載體、用于基因過(guò)表達的慢病毒載體、用于啟動(dòng)子活性研究的慢病毒載體等;
B. 慢病毒包裝過(guò)程:
將重組病毒質(zhì)粒及其輔助包裝質(zhì)粒共轉染至包裝細胞中,收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液,在293T細胞中測定并標定病毒滴度。
C. 慢病毒包裝結果:
滴定濃度:1×107~1×108TU/ml
zui終體積:1 ml純化后的病毒液(儲存于PBS)
儲存:批量?jì)Υ娴?條件為-80°C。
慢病毒包裝用途:
慢病毒載體包裝之后成為假病毒顆粒后,可用于:
· 感染原代細胞;
· 制備穩定表達/沉默特定基因的單克隆細胞株;
· in vivo的基因操作;
· 轉基因動(dòng)物,特別是轉基因大鼠的制備。