簡(jiǎn)要描述:用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說(shuō)明被檢測的位點(diǎn)不存在甲基化。
DNA甲基化修飾檢測服務(wù)
甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR,MSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過(guò)電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物,如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段,則說(shuō)明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說(shuō)明被檢測的位點(diǎn)不存在甲基化。
亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進(jìn)行PCR,在擴增過(guò)程中尿嘧啶全部轉化為胸腺嘧啶,zui后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化稱(chēng)為BSP-直接測序方法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測序,可以提高測序成功率,這種方法稱(chēng)為BSP-克隆測序法。
高分辨率熔解曲線(xiàn)法(High Resolution Melting,HRM)
在非CpG島位置設計一對針對亞硫酸氫鹽修飾后的DNA雙鏈的引物,這對引物中間的片段包含感興趣的CpG島。若這些CpG島發(fā)生了甲基化,用亞硫酸氫鹽處理后,未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴增后轉變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,樣品中的GC含量發(fā)生改變,從而導致熔解溫度的變化。
DNA甲基化送樣要求:
細胞(≥106 個(gè))、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,基因組DNA(體積≥20μl,濃度≥50 ng/μl)。
DNA甲基化提供結果:
引物序列、實(shí)驗報告、包括MSP產(chǎn)物的電泳圖片;引物序列、測序峰圖、陽(yáng)性克隆質(zhì)粒和實(shí)驗報告;擴增曲線(xiàn)、熔解曲線(xiàn)及實(shí)驗報告。